Análisis del karyotipo de Leishmania (Viannia) panamensis aislada de pacientes con leishmaniasis cutánea de la costa del pacífico en el Ecuador

El cariotipo ADN de aislamientos de Leishmania de pacientes con la forma cutánea de la enfermedad procedente de 9 zonas endémicas de la costa del pacífico del Ecuador, fueron analizados por electroforesis en gel de campo pulsado. Todos los stocks aislados, incluyendo aquellos de una misma área endémica, presentaron un patrón de bandas de ADN cromosómico diferente. La variación de tamaño en las bandas de ADN cromosómico resultó evidentemente particular en los cromosomas entre 400 y 800 kb. Sin embargo, se observaron también bandas de ADN de aproximadamente 230, 350, 800 y 850 kb. Sin embargo, se observaron también bandas de ADN de aproximadamente 230, 350, 800 y 850 kb. Debido a que un cariotipo ADN semejante ha sido reportado...

Identificación de las especies ecuatorianas de Leishmania por ELISA, utilizando anticuerpos monoclonales

Ciento veinte stocks de Leishmania, aislados de humanos, reservorios y vectores en 40 áreas diferentes de 13 provincias del Ecuador, fueron clasificados en 7 grupos por medio de la técnica de ELISA y 9 anticuerpos monoclonales específicos de especie. Ochenta y nueve de 125 aislamientos fueron identificados como L. (V) panamensis, 15 como L. (L) mexicana, 4 como L (L) amazonensis, 4 como L (V) brazilensis, 3 como L (L) major-like y 3 como L. (V) equatorensis. No se pudo determinar claramente la clasificación de 7 aislamientos.

Variaciones de la secuencia de nucleótidos en el gen I de subunidad de cytocromo C oxidasa, en especies de Leishmania

Se realizó la determinación de las secuencias parciales de nucleótidos de genes COI de 8 especies de Leishmania como: L (Leishmania) amazonensis, L.(Viannia) equatorensis. L.(V) major-like, L. (L) mexicana, L.(V) major, L.(V) guayanensis, L.(V) brazilensis y L.(V) panamensis por el método de PCR, utilizando primers diseñados para genes COI de paramecium. El presente estudio demostró que los primers son útiles para la amplificación de los genes COI de 4 especies: L.(V) major, L(V) guayanensis, L(V) braziliensis y L.(V) panamensis. Se determinó una secuencia parcial de genes COI de las 4 especies.

Un ensayo para detectar parásitos Leishmania en biopsias de piel embebidas en parafina utilizando la reacción en cadena de la polimerasa

Tratamos de detectar amastigotes de Leishmania en 11 biopsias de piel, ordinariamente fijadas en formalina y embebidas en parafina, de pecientes con leishmaniasis cutánea en el Ecuador, por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando primers específicos de organismos Leishmania que ya han sido reportados. En el presente estudio no fue posible confirmar el ADN amplificado específicamente por PCR, utilizando el ADN gemónico extraído de protozoarios Leishmania. Sin embargo, pudimos detectar solamente el ADN específico en algunos de los especímenes de piel fijados en formalina y embebidos en parafina. Modificando tal técnica, sería necesario establecer métodos más convenientes y confiables para detectar amastigotes de Leishmania por PCR...

Estudios preliminares sobre el diagnóstico de leishmaniasis cutánea utilizando muestras de biopsias de piel por reacción en cadena de polimerasa

Se estudiaron métodos de diagnóstico de leishmaniasis cutánea por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando parásitos vultivados y muestras de biopsias de piel del Ecuador. Se prepararon template ADNs por ebullición por 10 minutos en soluciones Chelex al 5 por ciento. Los parásitos Leishmania fueron detectados por PCR, utilizando primers designados desdel el minicírculo (13A y 13B)y gen mini-exon (S-1629 y S-1630. Los primers primero mencionados amplificaron productos no específicos en ADN humano, y la sensibilidad de la reacción fue baja. Los últimos nunca amplificaron productos específicos aún en templete humano y posibilitaron la identificación a nivel de subgénero. Cuando se aumentó la sensibilidad...

Investigación clínica de la leishmaniasis cutánea en el Ecuador por 5 años (1991-1995)

En este estudio analizamos datos y clínicos y epidemiológicos sobre las alteraciones cutáneas de la leishmaniasis. Un total de 348 pacientes con leishmaniasis cutánea residentes en Ecuador fueron examinados para este estudio. Las áreas de estudio fueron las provincias de Manabí, Los Ríos, Azuay y Esmeraldas. Estas áreas estan localizadas en la costa del pacífico y las estribaciones de los Andes. Cada paciente fue cuidadosamente examinado, clínica y parasitológicamente. De los 348 pacientes en este estudio, 204 fueron varones y 144 mujeres. La edad promedio de los pacientes fue 21.2 años (+-1.2 s.e) en los hombres, 18.9 años (+- 1.4 s.e) son mujeres y 20.2 años (+-0.9 s.e) en total. Los pacientes de menos de 20 años...

Similaridad karyotipo de aislamientos de Leishmania de pacientes, flebotominos, y un perro doméstico, identificando la cepa L mexicana como el agente causal de la leishmaniasis cutánea en los Andes ecuatorianos

Los karyotipos DNA de Leishmania, aislados en 3 comunidades diferentes de los Andes ecuatorianos fueron examinados por electroforesis en gel agarosa de campo pulsado. La similaridad en el karyotipo fue detectada en 12 aislamientos; 4 aislamientos humanos y uno canino, aislados en Paute, 4 aislamientos y 1 de flebotomino aislados en Huigra, y 2 aislamientos de flebotominos en Alausí. Las distancias horizontales entre Paute y Alausí, y entre Alausí y Huigra, son de alrededor de 80 km y 20 km respectivamente. El patrón de banda de el DNA cromosómico de estos aislamientos, se caracterizó por una cadena cromosómica ordenada, especialmente por la presencia de 4 cromosomas de bajo peso molecular de 220, 250 y 325 kilobases...

Anticuerpos monoclonales específicos de especies desarrollados contra Leishmania (Viannia) equatorensis

Se obtuvieron anticuerpos monoclonales contra promastigotes de Leishmania (Viannia), que fue recientemente descrita como una nueva especie (Grimaldi et al., 1992) Ratones BALB/c fueron inmunizados con homogenados de L. (v) equatorensis (promastigotes) obtenidos de un cultivo in vitro de 10 días. La fusión de células esplénicas inmunizadas con células de mieloma P3-X63-Ag8,6.5.3 resultó en la producción de 6 anticuerpos monoclonales (AcMs) contra L. (v) equatorensis. Entre estos, 5, AcMs 9F4, 7H6, 3A7, 8C1 y 1G5 se revelaron como específicos contra L (v) equatorensis por medio de ELISA contra un panel cruzado de cepas de Leishmania. Estos AcMs constituirán, por tanto, un útil incremento para el panel de ancicuerpos...

Comparación histopatológica y estructural de leishmaniasis animal experimental causada por diferentes cepas de Leishmania (Leishmania) mexicana aislada de pacientes con lesiones cutáneas localizadas y difusas

Con la finalidad de investigar algunos factores relacionados a diferentes formas clínicas, causadas por cepas o especies de Leishmania, se realizaron comparaciones histopatológicas y ultraestructurales. Con este propósito, se infectaron hámsters con promastigotes de Leishmania (Leishmania) mexicana, aislados de pacientes con dos tipos de formas clínicas, leishmaniasis cutáneo-difusa (LCD) y leishmaniasis cutánea lozalizada (LCL). No se encontraron aspectos histopatológicos ni ultraestructurales que indicasen un clara diferenciación entre las cepas de LCD y LCL. Los animales de experimentación utilizados fueron dividos en dos grupos como sigue: los hámsters en el grupo A fueron infectados con L (L) mexicana, aislada...

Evaluación in vitro de la actividad anti-promastigote de Leishmania de lotes de Glucantime (antimoniato de meglumina)

La actividad inhibitoria del crecimiento de promastigotes de Leishmania fue evaluada con 3 diferentes lotes de producción de antimoniato de meglumina (Glucantime), que ha venido siendo usado para el tratamiento de la leishmaniasis en el Ecuador. Por lo menos dos veces se detectaron diferencias en la actividad anti-promastigote de los diferentes lotes de Glucantime. La concentración efectiva de la droga que inhibió la proliferación de los promastigotes en un 50 por ciento (CE50) varió con diferentes especies de Leishmania, y los valores de CE50 de los lotes más efectivos estuvieron en el rango de 20-38 mg/m1 de Glucantine o 5.7-10.8 mg/m1 de antimonio.

Evaluación de ELISA en el diagnóstico de leishmaniasis en el Ecuador

El presente estudio fue diseñado para evaluar ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) como método diagnóstico para la leishmaniasis cutánea en el Ecuador. Se obtuvieron 95 sueros de los habitantes con lesiones cutáneas, en 3 áreas endémicas, San Plácido, Calceta y Junín, en la provincia de Manabí. En base a las manifestaciones químicas, se los dividió en 4 grupos; 11 tenían úlceras leishmaniásicas activas, 13 tenían cicatrices leishmaniásicas sin registro de tratamiento, 27 tenían lesiones leishmaniásicas y habían sido tratados, después de 1991, por nosotros, y 44 fueron considerados como no leishmaniásicos. Los sueros de estos individuos fueron sometidos a ELISA. Los antígenos para ELISA fueron preparados...

Leishmaniasis cutánea difusa: primer reporte de un caso parasitológicamente confirmado en el Ecuador

En el texto, se reporta por primera vez un caso parasitológicamente confirmado de leishmaniasis cutánea difusa en el Ecuador. El paciente fue seguido por más de 4 años y se realizaron exhautivos exámenes clínicos y de laboratorio, a fin de confirmar esta forma clínica de la enfermedad (leishmaniasis). La anergia al antígeno Leishmania y la respuesta refractaria a la quimioterapia fueron claramente demostradas. El parásito aislado fue identificado como Leishmania mexicana, por medio de análisis de karyodeme y zymodeme.

Investigación seroepidemiológica de la lepra en áreas endémicas de leishmaniasis cutánea en el Ecuador

Se realizaron exámenes serológicos para lepra en áreas endémicas de leishmaniasis cutánea, utilizando los sueros colectados durante un estudio de leishmaniasis y otras enfermedades parasitarias del Ecuador. No hubo correlación entre los índices de prevalencia de la lepra y los índices seropositivos de los anticuerpos (anticuerpos anti-PGL-I y LAM-B) en los individuos habitantes de algunas provincias de Ecuador. Los índices de positividad de los anticuerpos anti PGL-I de los pacientes leprosos y sus familiares en los Ranchos, provincia de Manabí, fueron relativamente altos (84.6 por ciento, 11/13), en comparación con los de los sujetos de otras áreas del Ecuador (42.2 por ciento, 154/365). Hemos sugerido que la investigación seroepidemiológica de los familiares de los pacientes leprosos podría ser útil...

Análisis cariotipo de aislamientos de leishmania del Ecuador por electroforesis de campo pulsado

Los cariotipos de los parásitos Leishmania mexicana, L. panamensis y L. major-like recientemente aislados en Ecuador fueron analizados por medio de electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). Un total de 18-21 cromosomas de 200 kb a más de 1,100 kb fueron resueltos, dependiendo de los aislamientos, utilizando un aparato graduable de electroforesis en gel de campo pulsado. El PFGE reveló cariotipos de DNA específicos de las especies para tres diferentes tipos de Leishmania. El cariotipo de L. mexicana fue casi idéntico entre cuatro aislamientos incluyendo tres de pacientes y uno por un perro en una pequeña comunidad andina, sugiriendo así que los perros domésticos pueden desempeñar un papel como hospedadores reservorios...

Observaciones histológicas de hámsters dorados infectados con una cepa ecuatoriana de Leishmania mexiacana

Se desarrolló un estudio experimental para investigar el efecto de la infección de hámsters dorados con Leishmania mexicana. Los animales fueron infectados con L. mexicana de Ecuador. En la autopsia, seis meses después de la inoculación, los sitios de infección se habían tornado en lesiones ulcerativas exudativas inflamatorias cubiertas con gruesas costras. No se observó metástasis cutáneas en otras partes expuestas del cuerpo. Histológicamente las muestras de la nariz y las plantas de los pies mortraban gran número de amastigotes, con infiltración extensiva de histiocitos, linfocitos, y alguna cantidad de neutrófilos, eosinófilos y células plasmáticas. Un importante número de células mastoideas era predominante...

Leishmania aislada de humanos en Ecuador

Durante el presente estudio, se obtuvieron 18 aislamientos del parásito Leishmania de pacientes de la costa del Pacífico y región amazónica, y 11 de la sierra o región interandina, todos a partir de lesiones ulcerosas. La distribución geográfica y los aspectos clínico y parasitológico son brevemente considerados. Parece que es más factible lograr aislamientos del parásito en la leishmaniasis de las tierras bajas en las primeras semanas de evolución, aunque es relativamente fácil lograrlo también en etapas tardías en la región andina o tierras altas.

Un nuevo ensayo de aislamiento de leishmania de animales domésticos y silvestres en Ecuador

A fin de identificar los hospedadores reservorios animales en diferentes áreas endémicas de leishmaniasis humana, 194 animales domésticos y silvestres fueron examinados en busca de parásitos. Por el método de punción hepática, 14 (7,2 por ciento) del total, resultaron positivos con protozoarios. Una cepa de perro doméstico de los Andes fue identificada como L. pifanoi (más tarde identificada como Le. mexicana) (Tesh y Grimaldi, comunicación personal). Otras sin embargo, permanecen inidentificadas, en busca de un método preciso de caracterización, utilizando electroforesis de isoenzimas (Kreutzer, comunicación personal).

Respuestas de pruebas intradérmicas con antígeno parcialmente purificado obtenido de promastigotes de leishmania panamensis en la leishmaniasis cutánea activa

El presente estudio fue diseñado para evaluar los antígenos preparados a partir de promastigotes de Leishmania panamensis para evaluar el skin test en pacientes con leishmaniasis cutánea. El antígeno crudo preparado (CA) utilizado el sobredadante del centrifugado de homogenado de parásito a 10,000 xg. El extracto soluble fue luego sometido a 4 preparaciones, denominadas FA-1 a Fa-4, con la ayuda de un Sephacryl S-200 de filtración en gel. Los parásitos enteros (5x10 parásitos por examen) preparados en salina fenolizada, fueron utilizados como un antígeno para Montenegro (MA). El skin test intradérmico fue hecho en 17 pacientes con leishmaniasis cutánea activa causada por Le. braziliensis (complejo). El radio positivo...

Reacción intradérmica (skin test) utilizando antígeno de promastigotes de Leishmania, en individuos de áreas endémicas de la costa y sierra del Ecuador

Un total de 229 pacientes individuos de las áreas endémicas de la costa y sierra del Ecuador, fueron examinados realizando skin test y observaciones dermatológicas. No se encontraron diferencias importantes en el grado de positividad del skin test entre individuos de las dos regiones. Sin embargo, una reacción fuertemente marcada se observó en sujetos de las alturas. Este tipo de reacción podría ser causado por la diferencia de la respuesta inmune de sujetos provenientes de las dos áreas endémicas del Ecuador.

Evaluación de la intradermo reacción y ELISA en el estudio epidemiológico de la leishmaniasis

El presente estudio fue diseñado para evaluar individual y comparativamente, la intradermo reacción y ELISA, como elementos de diagnóstico en el muestreo de la leishmaniasis cutánea y mucocutánea del Ecuador. El antígeno para la intradermo reacción fue preparado fragmentando promastigotes de L. braziliensis. Un estudio preliminar de intradermo reacción utilizando este antígeno, fue desarrollado en 63 individuos con lesiones dérmicas activas, junto a la prueba de ELISA. Los grados de positividad de ambas pruebas fueron significativamente altos en aquellos individuos cuyas lesiones fueron positivas para el parásito, demostrando alta sensibilidad y especificidad en los pacientes con leishmaniasis. Un estudio epidemiológico...